Todos los productos infundidos por vía parenteral han de ser estériles.

Dado que el análisis de esterilidad tradicional tiene difícil aplicación a los productos de Terapias Avanzadas, se permite el uso de métodos de detección alternativos que son implementados y validados según las especiales características de cada producto.

Cada centro participante podrá conocer la sensibilidad y especificidad de su método en relación al resto.

Los participantes deberán analizar de forma rutinaria la muestra recibida. Se deberá indicar el resultado (positivo vs. negativo), tiempo de detección y microorganismo aislado en su caso.

El análisis de Mycoplasma es un ensayo que ha de realizarse a todos los productos de Terapias Avanzadas. Este microorganismo es tradicionalmente uno de los posibles contaminantes de los cultivos celulares bien por su presencia en suplementos de medio cultivo como por la posible contaminación del personal involucrado en la fabricación.

El método de referencia, cultivo de Mycoplasmas, tiene una limitada aplicación debido al tiempo necesario para obtener un resultado. Por ello, los métodos alternativos de detección mediante amplificación de ácidos nucleicos (NAT-Test) son ampliamente utilizados entre los fabricantes de este tipo de medicamentos.

Los participantes deberán analizar de forma rutinaria la muestra recibida e indicar el resultado (positivo vs. negativo) y tiempo de detección en caso de usar el método de referencia.

Este test se utiliza para detectar o cuantificar endotoxinas de bacterias gran negativas utilizando lisado de amebocitos procedentes del cangrejo de herradura (Limulus polyphemus o Tachypleus tridentatus).

Existen 3 técnicas principales (formación de gel, turbidimetría y métodos cromogénicos) que pueden realizarse por varios métodos descritos en la farmacopea, habiendo para ello disponible una amplia gama de equipos y reactivos.

La identidad y pureza de los medicamentos de Terapias Avanzadas es habitualmente contrastada mediante el uso de la citometría de flujo.

Los marcadores de antígenos celulares son escogidos por cada centro según el tipo celular en cuestión. Este programa, en su inicio, se basa en el uso de células mesenquimales por lo que este ensayo estará disponible tan sólo para los centros que utilicen marcadores de este tipo celular.

Los marcadores inicialmente introducidos en el programa son aquellos recomendados por la ISCT (Internationl Society of Cell Therapy)1, aunque cada participante puede incluir aquellos otros que desee.

Los participantes deberán analizar de forma rutinaria una suspensión celular e indicar el porcentaje de expresión de cada uno de los antígenos de superficie investigados.

1. M. Dominici et al., “Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement,” Cytotherapy, vol. 8, no. 4, pp. 315–317, 2006.

Probablemente uno de los ensayos más realizados en el ámbito de los productos de Terapias Avanzadas. Con todo ello, posiblemente sea aquel que mayores problemas ocasiona a los usuarios.

Existen varios métodos y equipos disponibles para la realización de recuentos celulares pero la preparación de la muestra por parte del operario es uno de los puntos críticos que mayor imprecisión introduce en este ensayo.

Con la participación en esta prueba, cada centro podrá conocer el grado de implantación de la técnica evaluando no sólo el método en sí sino la pericia de los analistas implicados.

La importancia de establecer un adecuado proceso de fabricación, rentable, consistente y robusto es la finalidad perseguida por los fabricantes de medicamentos de Terapias Avanzadas. Existen varios suplementos de medios de cultivo, tradicionalmente se ha utilizado el Suero Bovino Fetal (SBF), de origen xenogénico, pero en los últimos años la tendencia ha sido la introducción de suplementos de origen no animal como Lisado Plaquetario humano (hPL) y suero humano AB (SH).

Cada fabricante suele establecer el tipo de suplemento usado y su proporción respecto del medio completo, siendo la rentabilidad en términos de “células recuperadas” y “duplicaciones celulares” la medida habitualmente utilizada para evaluar la capacidad de promoción de crecimiento del medio utilizado. Este crecimiento celular no es precisamente sencillo evaluar ya que intervienen otros factores importantes como el tipo y estatus del donante del que provienen las células, número de pases o duplicaciones anteriores, métodos de incubación y cultivo entre otros.

Con el fin de establecer medidas comparativas que puedan ser valiosas para los participantes, la adscripción a este ensayo permitirá a cada centro conocer la rentabilidad celular de su método en relación al resto, utilizando para ello el mismo cultivo celular (tipo celular, donante y número de duplicaciones previo al test)* con el fin de evaluar la composicion del medio de expansión, condiciones de cultivo y pericia del personal implicado.

Cada centro deberá cultivar según sus procedimientos internos una suspensión celular sembrada a igual concentración y durante el mismo tiempo. Se deberá reportar el número de células totales recuperadas y el número de duplicaciones obtenido.

*Inicialmente el programa estará disponible utilizando células mesenquimales troncales adultas.

La seguridad citogenética de los productos fabricados ha sido desde el nacimiento de este tipo de terapias una de las preocupaciones de la comunidad científica y de las entidades reguladoras. Existen varios métodos comúnmente aceptados y disponibles tales como el FISH, la hibridación genómica comparativa o array de CGH, la tinción de bandas G o Cariotipo entre otras.

Habitualmente este tipo de ensayos es subcontratado por los centros fabricantes de medicamentos debido a su complejidad técnica y especialización del personal necesario.

La participación en este ensayo es una medida directa para la evaluación del proveedor de servicios y la calidad analítica de sus resultados; por otro lado, proporciona soporte y contenido al ya tradicional requerimiento de las Normas de Correcta Fabricación de Medicamentos: la “Evaluación de proveedores”.

Los procedimientos de descongelación celular, al igual que la promoción recuento celular, es uno de los peculiares ensayos ampliamente utilizados durante la fabricación de medicamentos de terapias avanzadas. Sin embargo, al igual que los anteriores, posee un elevado componente de variación debido al método utilizado y a la pericia del personal implicado careciendo, de momento, de una automatización estandarizada y ampliamente implantada que permita obtener resultados reproducibles y precisos.
Un procedimiento de descongelación celular no es posible sin un proceso previo de criopreservación celular y ambos contribuyen a la obtención de resultados óptimos. En este programa de Evaluación Externa de la Calidad se ha optado, con fines de armonización, por dividir el proceso en 2 partes siendo las muestras criopreservadas de forma conjunta por el centro coordinador para conseguir la homogeneidad de las mismas y remitiendo a los centros participantes la muestra criopreservada para evaluar el proceso de descongelación.
Los participantes informarán el número de células viables obtenidas tras la descongelación del criotubo recibido.

De todos estos ensayos y de los procedimientos para armonizar la realización de los ensayos en cada uno de los centros se ofrece información detallada en el documento “Manual del Participante”